PCR (Polymerase Chain Reaction) 即聚合酶鏈?zhǔn)椒?/span>應(yīng)，又稱無細(xì)胞分子克隆系統(tǒng)或體外酶促基因擴(kuò)增法。其基本原理類似于 DNA 的天然復(fù)制過程，是在模板 DNA、引物和 4種脫氧核苷酸存在的條件下，依賴于 DNA 聚合酶的酶促合反應(yīng)，將待擴(kuò)增的DNA片段與其兩側(cè)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈引物經(jīng)“高溫變性——低溫退火——引物延伸”三步反應(yīng)的多次循環(huán)，使 DNA 片段在數(shù)量上呈指數(shù)增加，該技術(shù)可以將極微量的靶DNA 特異地擴(kuò)增上百萬倍，從而在短時間內(nèi)獲得所需的大量特定基因片段，因此能在臨床上檢測單分子 DNA或每 10 萬個細(xì)胞中僅含 1 個靶 DNA 分子的樣品。
二、PCR 實(shí)驗(yàn)室平面布局
根據(jù)《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定，臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室需要設(shè)置試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)等四個區(qū)域。如使用全自動分析儀，區(qū)域設(shè)置可以適當(dāng)合并。
雖然 PCR 實(shí)驗(yàn)室的四個功能分區(qū)是固定的，但各醫(yī)院在實(shí)際布置中卻千差萬別，其主要布置形式有分散式和集中式兩種。
分散式：各實(shí)驗(yàn)用房彼此相距較遠(yuǎn)，呈分散布置形式。各實(shí)驗(yàn)之間不易相互干擾。
集中式：完成 PCR 四個實(shí)驗(yàn)過程的實(shí)驗(yàn)用房相鄰布置，形成集中、獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)區(qū)域。每個實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)置獨(dú)立緩沖間、實(shí)驗(yàn)室間應(yīng)設(shè)置帶消毒裝置的傳遞窗。
在理想情況下，PCR 實(shí)驗(yàn)室緩沖間內(nèi)，可設(shè)置正壓，使室內(nèi)空氣不流向室外，室外空氣不流向室內(nèi)。若房間進(jìn)深允許，可設(shè) PCR 內(nèi)部專用走廊。在減少室內(nèi)外空氣交換方面，緩沖間比專用走廊更有意義。試劑和標(biāo)本通過機(jī)械連鎖傳遞窗傳遞，保證試劑和標(biāo)本在傳遞過程中不受污染，達(dá)到人、物分流。
三 .PCR 實(shí)驗(yàn)室的主要功能和設(shè)備配置
1. 試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)
該實(shí)驗(yàn)區(qū)主要進(jìn)行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于標(biāo)本制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū)，不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。
2. 標(biāo)本制備區(qū)
該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為臨床標(biāo)本的保存、核酸 (RNA、DNA) 提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測定RNA時cDNA 的合成。
本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域?yàn)檎龎海员?/span>免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。另外，由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動。
對具有潛在傳染危險性的材料，必須在生物安全柜內(nèi)開蓋，并有明確的樣本處理和滅活程序。
3. 擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)
該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為DNA或cDNA 擴(kuò)增。此外，已制備的 DNA 模板和合成的 cDNA( 來自樣本制備區(qū) ) 的加入和主反應(yīng)混合液 ( 來自試劑貯存和制備區(qū) ) 制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。在巢式 PCR 測定中，通常在第一輪擴(kuò)增后必須打開反應(yīng)管，因此巢式擴(kuò)增有較高的污染危險性，第二次加樣必須在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。
四 .PCR 實(shí)驗(yàn)室空調(diào)通風(fēng)設(shè)計
國際上，世界衛(wèi)生組織（WHO）一直非常重視實(shí)驗(yàn)室生物安全問題，早在 1983 年就出版了《實(shí)驗(yàn)室生物安全手冊》，2003年4月第二版 ( 修訂版 ) 以電子版形式在 WHO 網(wǎng)頁上問世。美國在實(shí)驗(yàn)室的生物安全管理方面更是走在了世界的前列，NIH/CDC 聯(lián)合出版的《微生物學(xué)及生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全準(zhǔn)則》現(xiàn)已推出了第四版。很多國家在制定本國的生物安全準(zhǔn)則時，主要參考上述兩個標(biāo)準(zhǔn)。
我國關(guān)于 PCR 實(shí)驗(yàn)室建設(shè)及管理的現(xiàn)行技術(shù)規(guī)范和標(biāo)準(zhǔn)有以下幾種：
《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范》；
《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理辦法》衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)【2010】194 號；
《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作導(dǎo)則》；
《生物安全實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)規(guī)范》 GB50346-2011；
《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》GB19489-2008；
《潔凈廠房設(shè)計規(guī)范》GB50073—2013；
《微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則》WS233-2002 中華人民共和國衛(wèi)生部；
實(shí)驗(yàn)室規(guī)范《JGJ91 科學(xué)實(shí)驗(yàn)室建筑設(shè)計規(guī)范》等。
